ДНКаза I
ДНКаза I (дэзаксірыбануклеаза I) - гэта эндадэзаксірыбануклеаза, якая можа пераварваць адна- або двухцепочечную ДНК.Ён распазнае і расшчапляе фасфадыэфірныя сувязі для атрымання монадэзаксінуклеатыдаў або адна- або двухцепочечных алігадэзаксінуклеатыдаў з фасфатнымі групамі на 5'-канцы і гідраксілам на 3'-канцы.Актыўнасць ДНКазы I залежыць ад Ca2+ і можа актывавацца іёнамі двухвалентных металаў, такіх як Mn2+ і Zn2+.5 мм Ca2+ абараняе фермент ад гідролізу.У прысутнасці Mg2+ фермент можа выпадковым чынам распазнаваць і расшчапляць любое месца на любой нітцы ДНК.У прысутнасці Mn2+ двайныя ланцугі ДНК могуць адначасова распазнавацца і расшчапляцца амаль у адным і тым жа месцы з адукацыяй фрагментаў ДНК з плоскім канцом або фрагментаў ДНК з ліпкіх канцоў з 1-2 выступаючымі нуклеатыдамі.
Уласцівасць прадукту
ДНКазу I падстраўнікавай залозы буйной рагатай жывёлы экспрэсавалі ў сістэме экспрэсіі дрожджаў і ачысцілі.
Cкампаненты
| Кампанент | Аб'ём | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| ДНКаза I, без РНКазы | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| Буфер 10×DNase I | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Транспарціроўка і захоўванне
1. Стабільнасць пры захоўванні: - 15 ℃ ~ -25 ℃ для захоўвання;
2.Transport Стабільнасць: Транспарт пад лёдам;
3. Пастаўляецца ў выглядзе: 10 мм Tris-HCl, 2 мм CaCl2, 50% гліцэрыны, pH 7,6 пры 25 ℃.
Вызначэнне адзінкі
Адна адзінка вызначаецца як колькасць фермента, які цалкам разбурыць 1 мкг ДНК pBR322 за 10 хвілін пры 37°C.
Кантроль якасці
РНКаза:5U ДНКазы I з 1,6 мкг MS2 РНК на працягу 4 гадзін пры 37 ℃ не прыводзяць да дэградацыі, як вызначана электрафарэзам у агарозным гелі.
Бактэрыяльны Эндатаксін:LAL-тэст, у адпаведнасці з Кітайскай фармакапеяй IV 2020 г., метад тэставання ліміту геля, агульнае правіла (1143).Змест бактэрыяльнага эндатаксіну павінна быць ≤10 EU/мг.
Інструкцыя па ўжыванні
1. Прыгатуйце рэакцыйны раствор у прабірцы без РНКазы ў прапорцыях, пералічаных ніжэй:
| Кампанент | Аб'ём |
| РНК | Х мкг |
| 10 × буфер ДНКазы I | 1 мкл |
| ДНКаза I, без РНКазы (5U/мкл) | 1 ЕД на мкг РНК |
| ddH2O | Да 10 мкл |
2,37 ℃ на працягу 15 хвілін;
3. Дадайце буфер тэрмінацыі, каб спыніць рэакцыю, і награвайце пры 65 ℃ на працягу 10 хвілін, каб інактываваць ДНКазу I. Узор можна непасрэдна выкарыстоўваць для наступнага эксперыменту па транскрыпцыі.
Заўвагі
1. Выкарыстоўвайце 1U ДНКазу I на мкг РНК або 1U ДНКазу I менш чым за 1 мкг РНК.
2. ЭДТА трэба дадаць да канчатковай канцэнтрацыі 5 мМ, каб абараніць РНК ад дэградацыі падчас інактывацыі фермента.
