Адчувальны да тэмпературы UNG
Тэмпературна-адчувальны UNG (TS-UNG) - гэта атрыманы шляхам рэкамбінантнай экспрэсіі ў кішачнай палачцы.Фермент каталізуе вызваленне вольнага урацила з урацилсодержащей одно- і двухцепочечной ДНК і неактыўны ў дачыненні да РНК.У параўнанні са звычайным ферментам UNG гена E. coli, фермент TS-UNG мае больш высокую актыўнасць пры нізкіх тэмпературах (20 ℃ ~ 37 ℃), адчувальны да тэмпературы і лёгка інактывуецца (50 ℃), пазбягаючы дэградацыі ампліфікацыі, якая змяшчае dUTP прадуктаў пры пакаёвай тэмпературы па рэшткавым актыўнасці, якая можа застацца пасля інактывацыі звычайнага фермента UNG.Такім чынам, фермент TS-UNG не толькі падыходзіць для рэакцыі прадухілення заражэння ПЦР, але таксама добра спалучаецца з праграмай ампліфікацыі RT-PCR і можа выкарыстоўвацца ў рэакцыі прафілактыкі заражэння RT-PCR.
Рэкамендаванае прымяненне
Узмацненне прафілактыкі заражэння
Умовы захоўвання
-20°C для працяглага захоўвання, варта добра змяшаць перад ужываннем, пазбягаць частага замарожвання-адтавання.
Буфер для захоўвання
20 мм Tris-HCl (pH 7,5), 100 мм NaCl, 0,1 мм ЭДТА, 1 мм DTT, стабілізатар, 50% гліцэрына.
Вызначэнне адзінкі
Колькасць фермента, неабходная для раскладання 1 мкг адналанцуговай ДНК, якая змяшчае асновы dU, за 1 гадзіну пры 37°C складае 1 адзінку актыўнасці (U).
Кантроль якасці
1.Электрафарэтычная чысціня SDS-PAGE больш за 98%
2.Актыўнасць дэградацыі, кантроль ад партыі да партыі, стабільнасць
3.Няма экзагеннай нуклеазнай актыўнасці, экзагеннай эндануклеазы або забруджвання экзануклеазай.
Інструкцыя
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) | Канчатковая канцэнтрацыя |
| 10 × ПЦР-буфер (без dNTP, Mg²+бясплатна) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкМ |
| dUTP (замяніць dTTP) | - | 200-600 мкМ |
| 25 мм MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мм |
| 5 ЕД/мкл Taq | 0,25 | 1,25 У |
| 1 ЕД/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Сумесь грунтоўкіа | 2 | 1× |
| Шаблон | - | <1 мкг/рэакцыю |
| ddH₂O | Да 50 | - |
Заўвага: a: Калі выкарыстоўваецца для qPCR/qRT-PCR, флуоресцентный зонд трэба дадаць у рэакцыйную сістэму.Звычайна канчатковая канцэнтрацыя праймера 0,2 мкМ можа даць добрыя вынікі;калі прадукцыйнасць рэакцыі дрэнная, канцэнтрацыю праймера можна рэгуляваць у дыяпазоне 0,2-1 мкМ.Звычайна канцэнтрацыя зонда аптымізуецца ў дыяпазоне 0,1-0,3 мкМ.Можна правесці эксперыменты з градыентам канцэнтрацыі, каб знайсці найлепшае спалучэнне праймера і зонда.
Заўвагі
1.Аптымальная тэмпература рэакцыі фермента TS-UNG адносна нізкая, і яе можна аптымізаваць у дыяпазоне 20 ℃ ~ 37 ℃, дазоўку фермента і час рэакцыі можна аптымізаваць у дыяпазоне 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 хвілін;і фермент можа быць інактываваны ў працэсе зваротнай транскрыпцыі.
2.Ён падыходзіць для ПЦР і ОТ-ПЦР для прадухілення заражэння.
3.Пазбягайце частага замарожвання-адтавання і не падвяргайце моцным ваганням тэмпературы.
4.Розныя гены, якія падлягаюць ампліфікацыі, маюць розную эфектыўнасць выкарыстання dUTP і адчувальнасць да фермента UNG, таму, калі выкарыстанне сістэмы UNG прыводзіць да зніжэння адчувальнасці выяўлення, рэакцыйную сістэму неабходна наладзіць і аптымізаваць. Калі вам патрэбна тэхнічная падтрымка, звяртайцеся нашай кампаніі.
