ДНКаза I (без Рназы) (5u/ul)
Кат. №: HC4007A
ДНКаза I (дэзаксірыбануклеаза I) - гэта эндадэзаксірыбануклеаза, якая можа пераварваць адна- або двухцепочечную ДНК.Ён распазнае і расшчапляе фасфадыэфірныя сувязі для атрымання монодезоксинуклеотидов або адна- або двухцепочечных алігадэзаксінуклеатыдаў з фасфатнымі групамі на 5'-канцы і гідраксілам на 3'-канцы.Актыўнасць ДНКазы I залежыць ад Ca2+і можа быць актываваны іёнамі двухвалентных металаў, такіх як Mn2+і зн2+.5 мм Ca2+абараняе фермент ад гідролізу.У прысутнасці Mg2+, фермент мог выпадковым чынам распазнаваць і расшчапляць любое месца на любой нітцы ДНК.У прысутнасці Мн2+, двайныя ланцугі ДНК могуць адначасова распазнавацца і расшчапляцца амаль у адным і тым жа месцы з адукацыяй фрагментаў ДНК з плоскім канцом або фрагментаў ДНК з ліпкіх канцоў з 1-2 выступаючымі нуклеатыдамі.
Кампаненты
| Імя | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| ДНКаза I, без РНКазы | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| Буфер 10×DNase I | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Умовы захоўвання
-25℃~-15℃ для захоўвання;Транспарт пад лёдам.
Інструкцыя
1. Прыгатуйце рэакцыйны раствор у прабірцы без РНКазы ў прапорцыях, пералічаных ніжэй:
| Кампанент | Аб'ём |
| РНК | X мкг |
| 10 × буфер ДНКазы I | 1 мкл |
| ДНКаза I, без РНКазы (5U/мкл) | 1 ЕД на мкг РНК① |
| ddH2O | Да 10 мкл |
Заўвага: ①Разлічыце аб'ём ДНКазы I, які неабходна дадаць, у залежнасці ад колькасці РНК.
2. 37 ℃ на працягу 15 хвілін;
3. Дадайце 0,5 М ЭДТА да канчатковай канцэнтрацыі 2,5 мм ~ 5 мм і награвайце пры 65 ℃ на працягу 10 хвілін, каб спыніць рэакцыю.Узор можна непасрэдна выкарыстоўваць для наступнай рэакцыі, напрыклад для зваротнай транскрыпцыіэксперыментаваць.
Вызначэнне адзінкі
Адна адзінка вызначаецца як колькасць фермента, які цалкам разбурыць 1 мкг pBR322ДНК за 10 хвілін пры 37 ℃.
Кантроль якасці
РНКаза:5U ДНКазы I з 1,6 мкг MS2 РНК на працягу 4 гадзін пры 37 ℃ не прыводзіць да дэградацыі яквызначаецца з дапамогай электрафарэзу ў агарозном гелі.
Заўвагі
1. Калі ласка, прыгатуйце 0,5 MEDTA самастойна.
2. Выкарыстоўвайце 1U ДНКазы I на мкг РНК.Аднак, калі РНК менш за 1 мкг, выкарыстоўвайце 1U ДНКазу I.
3. Калі ласка, змесціце фермент на лёд падчас працы.
