Superstart qPCR Premix plus-UNG
Кат. №: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG - гэта спецыялізаваны рэагент, прызначаны для якасных і колькасных рэакцый ПЦР у рэжыме рэальнага часу з выкарыстаннем выяўлення на аснове зонда, распрацаваны спецыяльна для працэсаў ліяфілізацыі.Ён змяшчае новы фермент гарачага старту Hotstart Taq plus (DG), актыўнасць фермента Taq якога закрыта пры пакаёвай тэмпературы, эфектыўна інгібіруючы неспецыфічную ампліфікацыю, выкліканую неспецыфічным адпалам праймера або адукацыяй дымера праймера ва ўмовах нізкай тэмпературы, паляпшаючы такім чынам спецыфічнасць рэакцыі ўзмацнення.Гэты рэагент выкарыстоўвае аптымізаваны спецыфічны буфер qPCR і сістэму абароны ад забруджвання UNG/dUTP для дасягнення хуткага гарачага запуску, што значна павышае эфектыўнасць і адчувальнасць рэакцый qPCR.Ён можа атрымліваць добрыя стандартныя крывыя ў шырокім дыяпазоне колькасных абласцей і дакладна выконваць колькаснае вызначэнне, эфектыўна прадухіляючы ілжывададатную ампліфікацыю, выкліканую рэшткавымі прадуктамі ПЦР або аэразольным забруджваннем.Гэты рэагент сумяшчальны з большасцю флуоресцентных колькасных прыбораў для ПЦР ад такіх вытворцаў, як Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad і Roche і інш., і дэманструе добрую стабільнасць у ліяфілізаванай форме.
Склад рэагентаў
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+бясплатна) (DG)
2. 250 мм MgCl2
3. 4 × ліяпратэктар (неабавязкова)
Умовы захоўвання
Доўгі захоўванне пры -20 ℃;можна захоўваць пры 4℃ да 3 месяцаў.Добра змяшайце перад ужываннем іпазбягаць паўторнага замарожвання і адтавання.
Велапратакол
| Працэдура | тэмп. | Час | Цыкл |
| Страваванне | 50 ℃ | 2 хв | 1 |
| Актывацыя палімеразы | 95 ℃ | 1~5 хв | 1 |
| Дэнатурацыя | 95 ℃ | 10~20 с | 40-50 |
| Адпал і нарошчванне | 56~64 ℃ | 20~60 с | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyПадрыхтоўка сцябла
|
Кампазіцыя |
Аб'ём 25 мкл |
Аб'ём 50 мкл |
Канчатковая канцэнтрацыя |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+бясплатна) (DG) | 5 мкл | 10 мкл | 1× |
| 250 мМ MgCl2 | 0,45 мкл | 0,9 мкл | 4,5 мм |
| 4×ліяпратэктар1 | 6,25 мкл | 12,5 мкл | 1× |
| 25× Сумесь грунтоўкі і зонда2 | 1 мкл | 2 мкл | 1× |
| Шаблон ДНК3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Да 25 мкл | Да 50 мкл | —— |
1. Канчатковая канцэнтрацыя 0,2 мкМ для праймераў звычайна дае добрыя вынікі;калі прадукцыйнасць рэакцыі дрэнная, пры неабходнасці адрэгулюйце канцэнтрацыю праймера ў межах 0,2-1 мкМ.Канцэнтрацыя зонда звычайна аптымізуецца ў дыяпазоне 0,1-0,3 мкм з дапамогай градыентных эксперыментаў для пошуку аптымальных камбінацый.
2. Колькасць копій генаў-мішэняў, якія змяшчаюцца ў розных тыпах шаблонаў, адрозніваецца;пры неабходнасці можна выканаць градыентнае развядзенне, каб вызначыць аптымальную колькасць дадання шаблону.
3. Гэтая сістэма можа быць лиофилизирована;калі кліенты выкарыстоўваюць гэтую сістэму без патрабаванняў сублімацыйнай сушкі, можна выбарачна дадаваць ліапратэктар 4 ×; калі патрабуюцца сублімацыйна высушаныя прадукты, падчас пацверджання прадукцыйнасці прадукту на стадыі вадкіх рэагентаў неабходна дадаць ліяпратэктар 4 × для забеспячэння адпаведнасці з кампанентамі ліяфілізаванай сістэмы і эфекты.
Калі сістэма выкарыстоўваеццаd для сублимационной сушкі, падрыхтаваць сістэма as наступнае:
| Кампазіцыя | 25мкл Сістэма рэакцыі |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+бясплатна) (DG) | 5 мкл |
| 250 мМ MgCl2 | 0,45 мкл |
| 4×ліяпратэктар | 6,25 мкл |
| 25× Сумесь грунтоўкі і зонда | 1 мкл |
| ddH2O | Да 18~20 мкл |
* Калі патрэбныя іншыя сістэмы сублімацыйнай сушкі, пракансультуйцеся асобна.
Працэс лиофилизацииss
| Працэдура | тэмп. | Час | Стан | Ціск |
| Папярэдняя замарозка | 4 ℃ | 30 хв | Трымай |
1 атм |
| -50℃ | 60 хв | Астуджэнне | ||
| -50℃ | 180 хв | Трымай | ||
| Першасная сушка | -30℃ | 60 хв | Ацяпленне |
Абсалютны вакуум |
| -30℃ | 70 хв | Трымай | ||
| Другасная сушка | 25 ℃ | 60 хв | Ацяпленне |
Абсалютны вакуум |
| 25 ℃ | 300 хв | Трымай |
2. Вышэйапісаны працэс ліяфілізацыі прызначаны толькі для даведкі.Розныя тыпы прадуктаў і розныя сублімацыйныя сушылкі маюць розныя параметры, таму можна ўносіць карэктывы ў адпаведнасці з фактычныміумоў падчас выкарыстання.
3. Розныя працэсы лиофилизации могуць быць прыдатныя для розных памераў партый лиофилизированногопрадуктаў, таму пры выкарыстанні для буйнамаштабнай вытворчасці неабходна правесці дастатковую праверку тэставання.
Інструкцыя па ўжыванні лиофилизатад парашок
1. Короткоцентрифугируйте лиофилизированный парашок;
2. Дадайце шаблон нуклеінавай кіслаты ў лиофилизированный парашок і дадайце вады да 25 мкл;
3. Добра змяшайце цэнтрыфугаваннем і запусціце на машыну.
Кантроль якасці:
1. Функцыянальнае даследаванне: адчувальнасць, спецыфічнасць, узнаўляльнасць КПЦР.
2. Адсутнасць экзагеннай нуклеазнай актыўнасці, адсутнасць экзагеннага забруджвання энда/экзануклеазай.
Тэхнічная інфармацыя:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG выкарыстоўвае новы фермент гарачага старту, які забяспечвае хуткі гарачы старт на працягу 1~5 хвілін;дзякуючы спецыяльнаму буфернаму складу ён падыходзіць для мультыплекснай флуоресцентной колькаснай ПЦР-рэакцыі.
2. Ён мае больш высокую спецыфічнасць, што значна паляпшае адчувальнасць колькаснага выяўлення межаў флуарэсцэнцыі ПЦР, нармалізуючы крывыя ампліфікацыі, значэнне флуарэсцэнцыі атрымлівае відавочнае паляпшэнне пры нізкай канцэнтрацыі шаблонаў, прыдатныя ў якасці рэагентаў для колькаснага выяўлення флуарэсцэнцыі высокай адчувальнасці.
3. Для праймераў з больш нізкай тэмпературай адпалу або фрагментаў даўжынёй больш за 200 п.н. рэкамендуецца 3-этапны метад.
4. Эфектыўнасць выкарыстання dUTP і адчувальнасць да фермента UNG адрозніваюцца для розных генаў-мішэняў, такім чынам, калі выкарыстанне сістэмы UNG прыводзіць да зніжэння адчувальнасці выяўлення, рэакцыйную сістэму неабходна скарэктаваць і аптымізаваць.Калі патрабуецца тэхнічная падтрымка, калі ласка, звяжыцеся з нашай кампаніяй.
5. Выкарыстоўвайце спецыяльныя месцы і піпеткі да і пасля ампліфікацыі, апранайце пальчаткі падчас працы і часта мяняйце іх;не адкрывайце рэакцыйную прабірку пасля завяршэння ПЦР, каб звесці да мінімуму забруджванне проб прадуктамі ПЦР.
