Прэмікс зонда Multiplex qPCR
Кат. №: HCB5051A
TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) - гэта папярэдні раствор для 2 × колькаснай ПЦР-ампліфікацыі ў рэжыме рэальнага часу, які характарызуецца высокай адчувальнасцю і спецыфічнасцю, мае сіні колер і мае эфект дадання ўзору.Гэты прадукт уяўляе сабой папярэдне змешаны рэагент 2× Mix, які дазваляе праводзіць да чатырох флуоресцентных колькасных рэакцый ПЦР у адной рэакцыйнай лунцы.Гэты прадукт утрымлівае метад генетычна мадыфікаваных антыцелаў да фермента Taq з гарачым стартам, што значна паляпшае адчувальнасць і спецыфічнасць ампліфікацыі.У той жа час гэты прадукт мае глыбока аптымізаваны буфер для некалькіх рэакцый, які можа палепшыць эфектыўнасць узмацнення рэакцыі і спрыяць эфектыўнаму ўзмацненню шаблонаў з нізкай канцэнтрацыяй.Гэты прадукт можа быць выкарыстаны для генатыпавання і мультыплекснага колькаснага аналізу.
Спецыфікацыя
| Гарачы старт | Убудаваны гарачы старт |
| Спосаб выяўлення | Праймер-зонд выяўлення |
| Метад ПЦР | кПЦР |
| Палімераза | Taq ДНК-палімераза |
| Тып выбаркі | ДНК |
Умовы захоўвання
Прадукт пастаўляецца з сухім лёдам і можа захоўвацца пры -25 ~ -15 ℃ на працягу 2 гадоў.
Інструкцыя
1. Рэакцыясістэма
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) | Канчатковая канцэнтрацыя |
| 2× TaqMan Multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Сумесь грунтоўкі (10 мкмоль/л) a | × | 0,1 - 0,5 мкмоль / л |
| Сумесь зондаў (10 мкмоль/л)b | × | 50 - 250 нмоль/л |
| Эталонны фарбавальнік Rox | 0,5 | 1× |
| Шаблон ДНК/кДНК | 1-10 | - |
| ddH2O | да 25 | - |
Заўвагі:Старанна змяшайце перад выкарыстаннем, каб пазбегнуць празмерных бурбалак ад інтэнсіўнага ўстрэсвання.
а.Канцэнтрацыя праймераў: Сумесь праймераў змяшчае некалькі пар праймераў, звычайна кожны з праймераў у канчатковай канцэнтрацыі 0,2 мкмоль/л, а таксама можа быць адрэгуляваны ў межах ад 0,1 да 0,5 мкмоль/л, калі гэта неабходна.
б.Канцэнтрацыя зонда: Probe Mix змяшчае некалькі зондаў з рознымі сігналамі флуарэсцэнцыі, і канцэнтрацыю кожнага зонда можна рэгуляваць у межах ад 50 да 250 нмоль/л у залежнасці ад канкрэтнай сітуацыі.
1.Даведачны фарбавальнік Rox: ён выкарыстоўваецца на прыборах для ампліфікацыі ПЦР у рэальным часе, такіх як Applied Biosystems, каб выправіць памылку сігналу флуарэсцэнцыі, які ствараецца паміж лункамі;гэты прадукт не ўтрымлівае фарбы Rox.Пры неабходнасці рэкамендуецца Cas#10200.
2.Развядзенне шаблону: кПЦР вельмі адчувальная, таму для выкарыстання рэкамендуецца разводзіць шаблон.Калі шаблонам з'яўляецца асноўны раствор кДНК, аб'ём шаблону не павінен перавышаць 1/10 ад агульнага аб'ёму.
3.Рэакцыйная сістэма: рэкамендуецца 25 мкл, 30 мкл або 50 мкл для забеспячэння эфектыўнасці і паўтаральнасці ампліфікацыі гена-мішэні.
4.Падрыхтоўка сістэмы: калі ласка, рыхтуйцеся ў звышчыстай лаўцы і выкарыстоўвайце наканечнікі і рэакцыйныя прабіркі без рэшткаў нуклеазы;рэкамендуецца выкарыстоўваць наканечнікі з фільтруюць картрыджамі.Пазбягайце перакрыжаванага і аэразольнага забруджвання.
2.Праграма рэакцыі
| Цыкл крок | тэмп. | Час | Цыклы |
| Пачаткова-дэнатурацыйны | 95 ℃ | 5 хвілін | 1 |
| Дэнатурацыя | 95 ℃ | 15 сек | 45 |
| Адпал/Пашырэнне | 60 ℃ | 30 сек |
Заўвагі:
1.Адпал/нарошчванне: тэмпературу і час можна адпаведным чынам адрэгуляваць у адпаведнасці з распрацаваным значэннем Tm грунтоўкі.
2.Атрыманне сігналу флуарэсцэнцыі: час атрымання сігналу флуарэсцэнцыі, неабходны для розных прыбораў для выяўлення qPCR, розны, усталюйце ў адпаведнасці з мінімальным лімітам часу.Час некалькіх распаўсюджаных інструментаў усталёўваецца наступным чынам:
20 секунд: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 сек.: Applied Biosystems 7300
32 сек.: Applied Biosystems 7500
Заўвагі
Калі ласка, апранайце неабходныя СІЗ, такія як лабараторны халат і пальчаткі, каб гарантаваць ваша здароўе і бяспеку!
