Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Кат. №: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) - гэта мультыплексны набор для колькаснай ПЦР на аснове РНК у якасці шаблону.У працэсе эксперыменту ў адной прабірцы праводзіліся зваротная транскрыпцыя і колькасная ПЦР, што спрашчала эксперыментальную працу і зніжала рызыку заражэння.У гэтым наборы першая ланцуг кДНК была эфектыўна сінтэзавана з дапамогай тэрмаўстойлівай зваротнай транскрыптазы і колькасна ўзмоцнена з дапамогай ДНК-палімеразы HotStart Tag.Камплект у асноўным утрымлівае аптымізаваны MP буфер, сумесь ферментаў і г.д. Буферны раствор ужо змяшчае Mg2+і dNTP.Акрамя таго, дададзены фактары, якія могуць эфектыўна інгібіраваць неспецыфічную ПЦР-ампліфікацыю і павышаць эфектыўнасць ампліфікацыі некалькіх рэакцый кПЦР, што можа забяспечыць эфектыўнасць ампліфікацыі і правесці рэакцыю шматразовай ампліфікацыі.Сістэма dUTP/UDG была дададзена для эфектыўнага прадухілення рызыкі аэразольнага заражэння.
Кампаненты
1. Буфер
2. Ферментная сумесь
Спецыфікацыя
| Гарачы старт | Убудаваны гарачы старт |
| Спосаб выяўлення | Праймер-зонд выяўлення |
| Метад ПЦР | Аднаэтапная RT-кПЦР |
| Палімераза | Taq ДНК-палімераза |
| Тып выбаркі | ДНК |
Умовы захоўвання
Прадукт пастаўляецца з сухім лёдам і можа захоўвацца пры -25 ~ -15 ℃ на працягу 1 года.Варта пазбягаць частыхзамарожванне-адтаванне.Рэкамендуецца захоўваць асобна.
Інструкцыя
1.Рэакцыя сістэма
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) | Канчатковая канцэнтрацыя |
| 2 × МП буфер | 12.5 | 1× |
| Сумесь ферментаў | 1 | - |
| Сумесь праймер/зонд (2,5 мкМ) | 3 | 0,3 мкМ |
| Матрычная РНК | 1-10 | - |
| H2O без РНКазы | да 25 | - |
Заўвагі:
Абавязкова добра змяшайце перад выкарыстаннем, пазбягайце празмерных бурбалак, выкліканых моцнай вібрацыяй.
а.Канцэнтрацыя праймера: Сумесь праймера, уключаючы мультыплексны праймер, у залежнасці ад сітуацыі аптымальная канцэнтрацыя праймера можа складаць ад 0,1 да 1,0 мкМ.
б.Канцэнтрацыя зонда: сумесь зонда, уключаючы розніцу ў маркіроўцы мультыплекснага зонда флуоресцентной групы, у залежнасці ад сітуацыі аптымальная канцэнтрацыя зонда можа складаць ад 0,05 да 0,5 мкМ.
в.Развядзенне шаблону: кПЦР вельмі адчувальная, таму рэкамендуецца разводзіць шаблон.Кантрольнае значэнне Ct падыходзіць ад 20 да 35.
d.Падрыхтоўка сістэмы: калі ласка, рыхтуйце на звышчыстым працоўным стале, піпетцы і рэакцыйнай прабірцы без рэшткаў нуклеазы;рэкамендуецца выкарыстоўваць галоўку пісталета з фільтруе элементам.Пазбягайце перакрыжаванага і аэразольнага забруджвання.
2. Аптымізаваны ВеласпортПратакол
| Цыкл крок | тэмп. | Час | Цыклы |
| Зваротная транскрыпцыя | 50 ℃а | 20 хвілін | 1 |
| Пачаткова-дэнатурацыйны | 95 ℃ | 5 хвілін | 1 |
| Рэакцыя ампліфікацыі | 95 ℃ | 15 сек |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 сек c |
Заўвагі:
а.Зваротная транскрыпцыя: тэмпература можа быць 42°C або 50°C.
б.Рэакцыя ампліфікацыі: Тэмпература рэгулюецца ў адпаведнасці са значэннем Tm распрацаваных праймераў.
в.Атрыманне сігналу флуарэсцэнцыі: Калі ласка, усталюйце эксперыментальную працэдуру ў адпаведнасці з патрабаваннямі інструкцыі па эксплуатацыі прыбора.
Заўвагі
Калі ласка, апранайце неабходныя сродкі індывідуальнай абароны, такія як лабараторны халат і пальчаткі, для забеспячэння вашага здароўя і бяспекі.
