ДНК-палімераза Robustart Taq
ДНК-палімераза Robustart Taq - гэта ДНК-палімераза з гарачым стартам.Гэты прадукт можа не толькі лепш інгібіраваць неспецыфічную рэакцыю, выкліканую неспецыфічным адпалам праймераў або агрэгацыяй праймераў у працэсе падрыхтоўкі і ампліфікацыі сістэмы ПЦР.Такім чынам, ён валодае выдатнай спецыфічнасцю і больш эфектыўны для ампліфікацыі шаблонаў з нізкай канцэнтрацыяй, а таксама падыходзіць для рэакцыі мультыплекснай ампліфікацыі ПЦР.Акрамя таго, гэты прадукт мае вельмі добрую прымяняльнасць, і стабільныя вынікі ампліфікацыі могуць быць атрыманы ў розных тыпах рэакцый ПЦР.
Кампаненты
1.5 ЕД/мкл ДНК-палімеразы Robustart Taq
2.10 × ПЦР-буфер II (без Mg²+) (неабавязкова)
3.25 мм MgCl2(неабавязкова)
* 10 × ПЦР-буфер II (без Mg²+) не ўтрымлівае dNTP і Mg²+, дадайце dNTP і MgCl2пры падрыхтоўцы рэакцыйнай сістэмы.
Рэкамендуемыя прыкладанні
1.Хуткае ўзмацненне.
2.Шматразовае ўзмацненне.
3.Прамая ампліфікацыя крыві, мазкоў і іншых узораў.
4.Выяўленне рэспіраторных захворванняў.
Умовы захоўвання
-20°C для працяглага захоўвання, варта добра змяшаць перад ужываннем, пазбягаць частага замарожвання-адтавання.
* Калі пасля захоўвання ў халадзільніку выпадае асадак, гэта нармальна;перад змешваннем і выкарыстаннем рэкамендуецца давесці да пакаёвай тэмпературы.
Вызначэнне адзінкі
Адна актыўная адзінка (U) вызначаецца як колькасць фермента, які ўключае 10 нмоль дэзаксірыбануклеатыду ў нерастваральны ў кіслаце матэрыял пры 74°C на працягу 30 хвілін з выкарыстаннем актываванай ДНК спермы ласося ў якасці матрыцы/праймера.
Кантроль якасці
1.Электрафарэтычная чысціня SDS-PAGE больш за 98%.
2.Адчувальнасць да ўзмацнення, кантроль ад партыі да партыі, стабільнасць.
3.Адсутнасць экзагеннай нуклеазнай актыўнасці, адсутнасць экзагеннай эндануклеазы або забруджвання экзануклеазай
Інструкцыя
Налада рэакцыі
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) | Канчатковая канцэнтрацыя |
| 10 × ПЦР-буфер II (без Mg²+)a | 5 | 1× |
| dNTP (10 мМ кожны dNTP) | 1 | 200 мкМ |
| 25 мм MgCl2 | 2-8 | 1-4 мм |
| ДНК-палімераза Robustart Taq (5U/мкл) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 У |
| 25 × Сумесь грунтоўкіб | 2 | 1× |
| Шаблон | - | ＜ 1 мкг/рэакцыю |
| ddH2O | Да 50 | - |
Заўвагі:
1) а.Буфер не ўтрымлівае dNTP і Mg²+, дадайце dNTP і MgCl2пры падрыхтоўцы рэакцыйнай сістэмы.
2) б.Пры выкарыстанні для qPCR/qRT-PCR у рэакцыйную сістэму трэба дадаць флуоресцентные зонды.Звычайна канчатковая канцэнтрацыя праймера 0,2 мкМ дасць добрыя вынікі;калі прадукцыйнасць рэакцыі дрэнная, канцэнтрацыю праймера можна рэгуляваць у дыяпазоне 0,2-1 мкМ.Канцэнтрацыя зонда звычайна аптымізуецца ў дыяпазоне 0,1-0,3 мкМ.Можна правесці эксперыменты з градыентам канцэнтрацыі, каб знайсці найлепшае спалучэнне праймера і зонда.
Пратакол цеплавога цыклу
| Звычайная ПЦРпрацэс | |||
| Крок | тэмпература | Час | Цыклы |
| Папярэдняя дэнатурацыя | 95 ℃ | 1-5 хвілін | 1 |
| Дэнатурацыя | 95 ℃ | 10-20 сек | 40-50 |
| Адпал / Пашырэнне | 56-64 ℃ | 20-60 сек | |
| Хуткая ПЦРпрацэс | |||
| Крок | тэмпература | Час | Цыклы |
| Папярэдняя дэнатурацыя | 95 ℃ | 30 сек | 1 |
| Дэнатурацыя | 95 ℃ | 1-5 сек | 40-45 |
| Адпал / Пашырэнне | 56-64 ℃ | 5-20 сек | |
Заўвагі
1.Хуткасць ампліфікацыі хуткай ДНК-полимеразы не павінна быць менш за 1 кб/10 с.Хуткасць павышэння і падзення тэмпературы, рэжым кантролю тэмпературы і эфектыўнасць цеплаправоднасці розных прыбораў ПЦР моцна адрозніваюцца, таму рэкамендуецца аптымізаваць аптымальныя ўмовы рэакцыі для канкрэтнага прыбора хуткай ПЦР.
2.Сістэма вельмі адаптыўная, з большай спецыфічнасцю і адчувальнасцю.
3.Падыходзіць для выкарыстання ў якасці высокаадчувальных рэагентаў для ПЦР-дэтэкцыі і можа выкарыстоўвацца ў рэакцыях мультыплекснай ПЦР-ампліфікацыі.
4.5′→3′ актыўнасць палімеразы, 5′→3′ актыўнасць экзануклеазы;адсутнасць экзонуклеазной актыўнасці 3′→5′;няма функцыі карэктуры.
5.Падыходзіць для якаснага і колькаснага тэставання ПЦР і ОТ-ПЦР.
6.3'-канец прадукту ПЦР - гэта А, які можна непасрэдна кланаваць у Т-вектар.
7.Трохэтапны метад рэкамендуецца для праймераў з нізкімі тэмпературамі адпалу або для ампліфікацыі фрагментаў даўжынёй больш за 200 п.н.
