Шчолачная фасфатаза (ШФ)
Апісанне
Шчолачная фасфатаза атрымана з рэкамбінантнага штаму E. coli, які нясе ген TAB5.Фермент каталізуе дэфасфараляванне 5' і 3' канцоў фасфаманоэфіраў ДНК і РНК.Акрамя таго, ён гідроліз рыбоза, а таксама дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (NTP і dNTP).Шчолачная фасфатаза TAB5 дзейнічае на 5' выступоўцы, 5' паглыбленыя і тупыя канцы.Фасфатазу можна выкарыстоўваць у многіх сферах малекулярнай біялогіі, такіх як кланаванне або маркіроўка канцоў зонда для выдалення фасфарыляваных канцоў ДНК або РНК.У эксперыментах па кланаванні дэфасфараляванне прадухіляе самалігаванне лінеарызаванай плазміднай ДНК.Ён таксама можа пагаршаць неўключаныя dNTP у рэакцыях ПЦР, каб падрыхтаваць шаблон для секвенирования ДНК.Фермент цалкам і незваротна інактывуецца пры награванні пры 70°C на працягу 5 хвілін, што робіць непатрэбным выдаленне фасфатазы перад перавязкай або канчатковай маркіроўкай.
Выкарыстанне
1. Шчолачная фасфатаза ў спалучэнні з вавёркамі (антыцелы, стрэптавідын і г.д.) можа спецыяльна ідэнтыфікаваць малекулы-мішэні і можа выкарыстоўвацца ў ELISA, WB і гістахімічным выяўленні;
2.Шчолачная фасфатаза можа выкарыстоўвацца для дэфасфарызацыі 5'-канца ДНК або РНК, каб прадухіліць самазвязванне;
3. Вышэйпаказаная дэфасфарыляваная ДНК або РНК можа быць пазначана фасфатамі, пазначанымі радыеактыўнасцю (праз полінуклеатыдкіназу Т4)
Хімічная будова
Спецыфікацыя
| Тэставыя прадметы | Тэхнічныя характарыстыкі |
| Актыўнасць ферментаў | 5 ЕД/мкл |
| Эндануклеазная актыўнасць | Не выяўлена |
| Актыўнасць экзонуклеазы | Не выяўлена |
| Актыўнасць нікінгу | Не выяўлена |
| Актыўнасць РНКазы | Не выяўлена |
| ДНК E.coli | ≤1 копія/5U |
| Эндатаксін | LAL-тэст, ≤10EU/мг |
| Чысціня | ≥95% |
Транспарціроўка і захоўванне
Транспарт:Эмбіент
Захоўванне:Захоўваць пры тэмпературы 2-8°C
Рэкамендаваны паўторны тэстжыццё:2 гады
