Рназе А
Рыбануклеаза А (РНКаза) - адналанцуговы поліпептыд, які змяшчае 4 дысульфідныя сувязі з малекулярнай масай каля 13,7 кДа.РНКаза А - гэта эндарыбануклеаза, якая спецыяльна расшчапляе адналанцуговую РНК па астатках C і U.У прыватнасці, пры расшчапленні распазнаецца фасфадыэфірная сувязь, утвораная 5'-рыбозай нуклеатыду і фасфатнай групай на 3'-рыбозе суседняга пірымідынавага нуклеатыду, так што 2,3'-цыклічныя фасфаты гідралізуюцца да адпаведных 3 ′нуклеазідфасфаты (напрыклад, pG-pG-pC-pA-pG расшчапляецца РНКазай А для атрымання pG-pG-pCp і A-PG).РНКаза А найбольш актыўна расшчапляе одноцепочечную РНК.Рэкамендуемая працоўная канцэнтрацыя 1-100 мкг/мл, сумяшчальная з рознымі рэакцыйнымі сістэмамі.Нізкая канцэнтрацыя солі (0-100 мМ NaCl) можа быць выкарыстана для разразання адналанцуговай РНК, двухцепочечной РНК і ланцугоў РНК, утвораных у выніку гібрыдызацыі РНК-ДНК.Аднак пры высокай канцэнтрацыі солі (≥0,3 М) РНКаза А спецыфічна расшчапляе толькі адналанцуговую РНК.
РНКаза А часцей за ўсё выкарыстоўваецца для выдалення РНК падчас падрыхтоўкі плазміднай ДНК або геномнай ДНК. Незалежна ад таго, актыўная ДНКаза ў працэсе падрыхтоўкі, можа лёгка паўплываць на рэакцыю.Традыцыйны метад кіпячэння на вадзяной лазні можна выкарыстоўваць для інактывацыі ДНКазной актыўнасці.Гэты прадукт не ўтрымлівае ДНКазы і протеазы і не патрабуе тэрмічнай апрацоўкі перад ужываннем.Акрамя таго, гэты прадукт таксама можна выкарыстоўваць у эксперыментах па малекулярнай біялогіі, такіх як аналіз абароны РНКазы і аналіз паслядоўнасці РНК.
Умовы захоўвання
Прадукт можна захоўваць пры тэмпературы -25 ~ -15 ℃, тэрмін дзеяння - 2 гады.
Інструкцыя
Гэта адзін з распаўсюджаных метадаў падрыхтоўкі раствора для захоўвання РНКазы A.Яго таксама можна прыгатавацьіншыя метады ў адпаведнасці з традыцыйнымі метадамі ў лабараторыі або даведачнай літаратуры (напрыклад,прамое растварэнне ў 10 мм Tris-HCl, pH 7,5 або раствор Tris-NaCl)
1. Выкарыстоўвайце 10 ммоль ацэтату натрыю (pH 5,2), каб прыгатаваць 10 мг/мл раствора для захоўвання РНКазы А
2. Награванне пры 100 ℃ на працягу 15 хвілін
3. Астудзіце да пакаёвай тэмпературы, дадайце 1/10 аб'ёму 1 М Tris-HCl (pH 7,4), давядзіце pH да 7,4 (длянапрыклад, дадайце 500 мл 10 г/мл раствора для захоўвання РНКазы 1M Tris-HCL, PH7,4)
4. Расфасаваны пры -20 ℃ для захоўвання ў замарожаным выглядзе, які можа быць стабільным да 2 гадоў.
[Заўвагі]: пры кіпячэнні раствора РНКазы ў нейтральных умовах утворыцца асадак РНКазы;Варыце яго пры больш нізкім рн, і калі ёсць асадак, гэта можа назірацца, што можа быць выклікана наяўнасцю бялковых прымешак.Калі пасля кіпячэння знойдзены асадак, прымешкі можна выдаліць з дапамогай высакахуткаснага цэнтрыфугавання (13000 абаротаў у хвіліну), а затым упакаваць для захоўвання ў замарозцы.
Інфармацыя аб прадукце
| Сінонімы | Рыбануклеаза I;Рыбануклеаза падстраўнікавай залозы;Рыбануклеаза 3'-пиримидноолигонуклеотидогидролаза;Рназа А;Эндарыбонульцэаза I |
| нумар CAS | 9001-99-4 |
| Знешні выгляд | Белы лиофилизированный парашок |
| Малекулярная маса | ~ 13,7 кДа (амінакіслотная паслядоўнасць) |
| Значэнне Ph | 7,6 (дыяпазон актыўнасці 6-10) |
| Прыдатная тэмпература | 60 ℃ (дыяпазон актыўнасці 15-70 ℃) |
| Актывуючы сродак | Na2+.К+ |
| Інгібітар | Інгібітар Рназы |
| Метад інактывацыі | Нельга дэактываваць награваннем, рэкамендуецца выкарыстоўваць цэнтрыфужную калонку |
| Паходжанне | Бычыны |
| Растваральнасць | Раствараецца ў вадзе (10 мг/мл) |
| Страта на сухім | ≤5,0% |
| Актыўнасць ферментаў | ≥60 адзінак Куніца/мг |
| Ізаэлектрычная кропка | 9.6 |
Заўвагі
Для вашай бяспекі і здароўя, калі ласка, апранайце лабараторныя халаты і аднаразовыя пальчаткі для працы.
