RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Гэты прадукт змяшчае рэакцыйны буфер, RT-Enzymes Mix (Bst ДНК-палімераза і тэрмаўстойлівая зваротная транскрыптаза), ліяфілізаваныя ахоўныя рэчывы і храмагенныя кампаненты фарбавальніка.Для выкарыстання проста выкарыстоўвайце буфер, фермент рэакцыі і праймер змешваюцца і дадаюцца ў шаблон;даданне лиофилизированного ахоўнага можа быць прамым.Яго падключылі да ліафілізатара і ліяфілізавалі, і пры выкарыстанні дадаваліся толькі праймеры і шаблоны.Гэты набор забяспечвае хуткае і дакладнае візуальнае выяўленне ўзмацнення, прычым адмоўная рэакцыя пазначана чырвоным колерам, а станоўчая рэакцыя - зменай жоўтага.
Кампанент
| Кампанент | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Буфер ампліфікацыі, апасродкаваны цыклам (з фарбавальнікам) | 0,96 мл | 4,80 мл × 2 | 9,60 мл × 10 |
| Сумесь RT-ферментаў | 270 мкл | 2,70 мл | 2,70 мл × 10 |
| Лиофилизированный ахоўны сродак | 0,96 мл × 2 | 9,60 мл × 2 | 9,60 мл × 20 |
Прыкладанні
Для ізатэрмічнай ампліфікацыі ДНК або РНК.
Умовы захоўвання
Транспартуецца з сухім лёдам, захоўваецца пры -25 ~ -15 ℃.Пазбягайце частага замарожвання-адтавання, прадукт прыдатны на працягу 12 месяцаў.
Пратакол
1.Рэакцыйны буфер, які будзе выкарыстоўвацца, размарозьце пры пакаёвай тэмпературы.Каротка змяшайце або перавярніце прабіркі некалькі разоў, каб старанна перамяшаць, затым адцэнтрыфугуйце, каб сабраць вадкасць на дно прабіркі.
2.Падрыхтоўка рэакцыйнай сістэмы.Гэты рэагент можна прыгатаваць у двух рэакцыйных сістэмах: вадкай рэакцыйнай сумесі і ліяфілізаванай сістэмнай сумесі.
1) Прыгатуйце вадкую рэакцыйную сумесь
| Кампанент | Аб'ём |
| Буфер ампліфікацыі, апасродкаваны цыклам (з фарбавальнікам) | 10 мкл |
| Сумесь RT-ферментаў | 2,8 мкл |
| 10 × сумесь грунтоўкіa | 5 мкл |
| Шаблоны ДНК/РНК b | × мкл |
| Безнуклеазная вада | Да 50 мкл |
2) Сумесь сістэмы лиофилизации
① Прыгатуйце лиофилизированную сумесь
| Кампанент | Аб'ём |
| Буфер ампліфікацыі, апасродкаваны цыклам (з фарбавальнікам) | 10 мкл |
| Лиофилизированный ахоўны сродак | 20 мкл |
| Сумесь RT-ферментаў | 2,8 мкл |
| Безнуклеазная вада | Да 50 мкл |
② Ліяфілізацыя: падрыхтаваную сумесь ліяфілізавалі ў сістэме аб'ёмам 50 мкл.
③ Прыгатуйце рэакцыйную сумесь
| Кампанент | Аб'ём |
| Лиофилизированная сумесь | 1 шт |
| 10 × сумесь грунтоўкіa | 5 мкл |
| Шаблоны ДНК/РНК b | × мкл |
| Безнуклеазная вада | Да 50 мкл |
Заўвагі:
1) а.10×Праймерная сумесь: 16 мкМ FIP/BIP, 2 мкМ F3/B3, 4 мкМ Loop F/B;
2) б.DEPC (растваральны ў вадзе) рэкамендуецца для нуклеінавых кіслот.
1.Інкубуйце пры 65°C на працягу 30-45 хвілін, якія можна адпаведна падоўжыць у залежнасці ад змены колеру. Час рэакцыі.
2.Няўзброеным вокам жоўты быў станоўчым, а чырвоны - адмоўным.
Заўвагі
1.На дне буфернай прабіркі можа з'явіцца соль, ненадоўга ўзбіце або некалькі разоў перавярніце прабіркі, каб старанна перамяшаць пры пакаёвай тэмпературы.
2.Тэмпература рэакцыі можа быць аптымізавана паміж 62 ℃ і 68 ℃ у залежнасці ад стану праймераў.
3.Упакаваныя рэагенты не павінны знаходзіцца на паветры працяглы час.
4.Рэакцыя абескаляроўвання ў чырвоны і жоўты колер залежыць ад змены рн рэакцыйнай сістэмы, калі ласка, не выкарыстоўвайце раствор для захоўвання нуклеінавай кіслаты Трыс, рэкамендуецца выкарыстоўваць ddH2O назапашаная нуклеінавая кіслата;
5.Эксперымент павінен быць стандартызаваны, уключаючы падрыхтоўку рэакцыйнай сістэмы, ліяфілізацыі, апрацоўку і даданне ўзору;
6.Каб пазбегнуць заражэння, рэкамендуецца рыхтаваць рэакцыйную сістэму ў звышчыстай лаўцы, у іншых выпадках Дадайце шаблоны ў выцяжную шафу памяшкання, каб пазбегнуць ілжывых спрацоўванняў.
