Рэагент для вызвалення ўзору
Рэагент для вызвалення ўзораў прызначаны для сцэнарыяў малекулярнай дыягностыкі POCT.Для дзвюх сістэм прамой ампліфікацыі LAMP і прамой ампліфікацыі ПЦР няма неабходнасці ў экстракцыі нуклеінавых кіслот.Неачышчаны лізат узору можа быць непасрэдна ампліфікаваны, мэтавы ген можа быць дакладна выяўлены, час выяўлення ўзору можа быць дадаткова скарочаны, што цалкам адпавядае патрабаванням прымянення малекулярнай POCT.Ён падыходзіць для мазкоў з носа, горла і іншых тыпаў узораў.Апрацаваныя ўзоры можна непасрэдна выкарыстоўваць для колькаснай флуарэсцэнтнай ПЦР або LAMP дэтэкцыі ў рэжыме рэальнага часу, і тыя ж вынікі, што і звычайнымі метадамі экстракцыі, могуць быць дасягнуты без складаных аперацый экстракцыі нуклеінавых кіслот.
Умовы захоўвання
Транспартаваць і захоўваць пры пакаёвай тэмпературы.
Кантроль якасці
Функцыянальнае выяўленне - колькасная ПЦР: сістэма рэагентаў для вызвалення ўзору 800 мкл была ўзмоцнена
з 1000 копіямі новага псеўдавіруса, аднаго ўзору мазка з носа, у выніку аналагічныя крывыя ампліфікацыі іЗначэнні ΔCt у межах ± 0,5 Ct.
Эксперыментальная працэдурарэз
1. Вазьміце 800 мкл рэагента для вызвалення ўзору і раскладзеце раствор для лізісу ў прабірку для ўзяцця проб аб'ёмам 1,5 мл.
2. Вазьміце мазок з носа або горла разам з тампонам; Працэдура ўзяцця мазка з носа: вазьміце стэрыльны тампон і ўвядзіце яго ў ноздры, павольна прасуньце прыкладна на 1,5 см у глыбіню, асцярожна павярніце 4 разы на слізістай абалонцы носа больш за 15 секунд , затым паўтарыце тую ж самую аперацыю ў другой паражніны носа з тым жа тампонам. Працэдура ўзяцця мазка з горла: вазьміце стэрыльны тампон і акуратна, хутка працярыце глоточные міндаліны і заднюю сценку глоткі 3 разы.
3.Адразу змесціце тампон у трубку для ўзяцця проб.Галоўку тампона трэба паварочваць і змешваць у растворы для захоўвання не менш за 30 секунд, каб пераканацца, што ўзор цалкам элюіраваны ў прабірцы для проб.
4. Інкубацыя пры пакаёвай тэмпературы (20 ~ 25 ℃) на працягу 1 хвіліны, падрыхтоўка буфера для лізісу завершана.
5. Абедзве 25 мкл сістэмы RT-PCR і RT-LAMP былі сумяшчальныя з 10 мкл дабаўкі шаблону для эксперыментаў па выяўленні.
Заўвагі
1. Мінімальная колькасць прамога лізата ўзору, адпаведная аднаму тампону, можа быць скарэкціравана да 400 мкл, што можа быць скарэкціравана ў адпаведнасці з патрэбамі тэставання.
2. Пасля таго, як узор будзе апрацаваны рэагентам для вызвалення ўзору, рэкамендуецца як мага хутчэй правесці наступны этап тэсту, пажадана, каб інтэрвал чакання быў менш за 1 гадзіну.
3. pH лізата ўзору кіслы, і сістэма выяўлення павінна мець пэўны буфер.Ён падыходзіць для большасці ПЦР, ОТ-ПЦР і флуарэсцэнтнага выяўлення LAMP з буферам pH, але не падыходзіць для каларыметрычнага выяўлення LAMP без буфера.
