Ультрануклеаза
UltraNuclease - гэта генна-інжынерная дэндануклаза, атрыманая з Serratia marcescens, якая здольная расшчапляць ДНК або РНК, двухланцуговыя або адналанцуговыя, лінейныя або кругавыя ў шырокім дыяпазоне ўмоў, цалкам расшчапляць нуклеінавыя кіслоты да 5'-монафасфатных алігануклеатыдаў з даўжынёй 3-5 асноў .Пасля мадыфікацыі геннай інжынерыі прадукт быў ферментаваны, экспрэсаваны і ачышчаны ў кішачнай палачцы (E. coli), што зніжае глейкасць клеткавага супернатанту і клеткавага лізата ў навуковых даследаваннях, а таксама паляпшае эфектыўнасць ачысткі і функцыянальнае даследаванне бялку.Ён таксама можа быць выкарыстаны ў геннай тэрапіі, ачыстцы вірусаў, вытворчасці вакцын, фармацэўтычнай прамысловасці бялкоў і поліцукрыдаў у якасці рэагента для выдалення рэшткаў нуклеінавых кіслот.
Асаблівасці прадукту
| нумар CAS | 9025-65-4 |
| № EC | |
| Малекулярная маса | 30 кДа |
| Ізаэлектрычная кропка | 6,85 |
| Чысціня бялку | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Канкрэтная дзейнасць | ≥1.1×106U/мг |
| Аптымальная тэмпература | 37°C |
| Аптымальны pH | 8,0 |
| Пратэазная актыўнасць | адмоўны |
| Біягруз | <10 КОЕ/100 000 ЕД |
| Рэшткавы бялок клеткі-гаспадара | ≤10 частак на мільён |
| Хэві-метал | ≤10 частак на мільён |
| Бактэрыяльны эндатаксіны | <0,25EU/1000U |
| Буфер захоўвання | 20 мм Tris-HCl, pH 8,0, 2 мм MgCl2, 20 мм NaCl, 50% гліцэрына |
Умовы захоўвання
≤0°C пры транспарціроўцы；-25~-15°C Захоўванне，2 гады дзеяння (пазбягаць замарожвання-адтавання).
Вызначэнне адзінкі
Колькасць фермента, які выкарыстоўваўся для змены значэння паглынання △A260 на 1,0 на працягу 30 хвілін пры 37 °C, pH 8,0, што эквівалентна расшчапленню 37 мкг ДНК спермы ласося шляхам разразання на алігануклеатыды, было вызначана як актыўная адзінка (U).
Кантроль якасці
Рэшткавы бялок клеткі-гаспадара: камплект ІФА
•Пратэаза Рэшткі: 250 KU/мл UltraNuclease рэагавала з субстратам на працягу 60 хвілін, ніякай актыўнасці не выяўлена.
•Бактэрыяльны эндатаксіны: LAL-тэст, Фармакапея Кітайскай Народнай Рэспублікі, том 4 (выданне 2020 г.), метад тэставання на абмежаванне геля.Агульныя правілы (1143).
•Біянагрузка: Фармакапея Кітайскай Народнай Рэспублікі Том 4 (выданне 2020 г.)— Агульныя
Правілы тэсту на стэрыльнасць (1101), Нацыянальны стандарт КНР, GB 4789.2-2016.
•Хэві-метал:ICP-AES, HJ776-2015.
Аперацыя
Актыўнасць UltraNuclease значна інгібіруецца, калі канцэнтрацыя SDS перавышае 0,1% або ЭДТА
канцэнтрацыя была больш за 1 мМ. Павярхоўна-актыўныя рэчывы Triton X- 100, Tween 20 і Tween 80 не аказалі ўплыву на нуклеазу.
ўласцівасці, калі канцэнтрацыя была менш за 1,5%.
| Аперацыя | Аптымальная праца | Сапраўдная аперацыя |
| тэмпература | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 мм | 1- 15 мм |
| DTT | 0- 100 мМ | >100 мМ |
| 2-Меркаптаэтанол | 0- 100 мМ | >100 мМ |
| Іён аднавалентнага металу （Na+, K+ і г.д.） | 0-20 мМ | 0-200 мМ |
| PO43- | 0-10 мМ | 0- 100 мМ |
Выкарыстанне і дазавання
• Выдаленне экзагеннай нуклеінавай кіслаты з прадуктаў вакцын, зніжэнне рызыкі таксічнасці рэшткавых нуклеінавых кіслот і павышэнне бяспекі прадукту.
• Паменшыць глейкасць кармавой вадкасці, выкліканую нуклеінавай кіслатой, скараціць час апрацоўкі і павялічыць выхад бялку.
• Выдаліце нуклеінавую кіслату, якая ахінула часціцу (вірус, цела ўключэння і г.д.), што спрыяе
да вызвалення і ачышчэння часціцы.
| Эксперыментальны тып | Вытворчасць бялку | Вірус, вакцына | Клеткавыя прэпараты |
| Колькасць вочак | 1 г сырой масы клетак (ресуспендируют з 10 мл буфера) | 1 л закісання вадкі супернатант | 1L культуры |
| Мінімальная дазоўка | 250U | 100U | 100U |
| Рэкамендуемая дазавання | 2500U | 25000U | 5000U |
• Апрацоўка нуклеазай можа палепшыць раздзяленне і аднаўленне ўзору для калонкавай храматаграфіі, электрафарэзу і аналізу блоттинга.
• У геннай тэрапіі нуклеінавая кіслата выдаляецца для атрымання вычышчаных аденоассоциированных вірусаў.
