ДНК-палімераза Warm Start Bst 2.0 (без гліцэрыны)
ДНК-палімераза Bst V2 паходзіць ад ДНК-палімеразы I Bacillus stearothermophilus, якая мае актыўнасць ДНК-палімеразы 5′→3′ і моцную актыўнасць замены ланцуга, але не мае экзануклеазнай актыўнасці 5′→3′.ДНК-палімераза Bst V2 ідэальна падыходзіць для перамяшчэння ланцугоў, ізатэрмічнай ампліфікацыі LAMP (ізатэрмічнай ампліфікацыі, апасродкаванай петлёй) і хуткага секвенавання.Bst ДНК-палімераза V2 - гэта версія з гарачым стартам на аснове Bst ДНК-палімеразы V2 (HC5005A), атрыманай з дапамогай тэхналогіі зварачальнай мадыфікацыі, якая можа інгібіраваць актыўнасць ДНК-палімеразы пры пакаёвай тэмпературы, таму рэакцыйная сістэма можа працаваць і складацца пры пакаёвай тэмпературы, каб прадухіліць не -спецыфічнае ўзмацненне і павышэнне эфектыўнасці рэакцыі, і гэтая версія можа быць лиофилизирована.Акрамя таго, яго актыўнасць вылучаецца пры высокіх тэмпературах, таму няма неабходнасці ў асобным этапе актывацыі.
Кампаненты
| Кампанент | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst ДНК-палімераза V2 (без гліцэрыны) (8U/мкл) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| Буфер 10×HC Bst V2 | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100 мМ) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Прыкладанні
1.LAMP ізатэрмічнае ўзмацненне
2.Рэакцыя адзінкавага зрушэння ланцуга ДНК
3.Высокае секвенирование гена GC
4.Секвенирование ДНК нанаграммового ўзроўню.
Умовы захоўвання
Транспарціроўка пры тэмпературы ніжэй за 0°C і захоўванне пры тэмпературы ад -25°C~-15°C.
Вызначэнне адзінкі
Адна адзінка вызначаецца як колькасць фермента, які ўключае 25 нмоль dNTP у нерастваральны ў кіслаце матэрыял за 30 хвілін пры 65°C.
Кантроль якасці
1.Аналіз чысціні бялку (SDS-PAGE):Чысціня Bst ДНК-палімеразы V2 складае ≥99%, вызначаецца аналізам SDS-PAGE з выкарыстаннем выяўлення Кумасі сіняга.
2.Eндануклеазаактыўнасць:Інкубацыя 50 мкл рэакцыі, якая змяшчае мінімум 8 ЕД Bst ДНК-палімеразы V2 з 1 мкг λДНК на працягу 16 гадзін пры 37 ℃, не прыводзіць да выяўленай дэградацыі.
3.Актыўнасць экзонуклеазы:Інкубацыя 50 мкл рэакцыі, якая змяшчае мінімум 8 ЕД Bst ДНК-палімеразы V2 з 1 мкг λ -Hind Ⅲ пераваранай ДНК, на працягу 16 гадзін пры 37 ℃ не прыводзіць да выяўленай дэградацыі, як вызначана.
4.Актыўнасць Nickase:Інкубацыя 50 мкл рэакцыі, якая змяшчае мінімум 8 ЕД Bst ДНК-палімеразы V2 з 1 мкг pBR322 ДНК на працягу 16 гадзін пры 37°C, не прыводзіць да выяўленай дэградацыі.
5.Актыўнасць РНКазы:Інкубацыя 50 мкл рэакцыі, якая змяшчае мінімум 8 ЕД Bst ДНК-палімеразы V2 з 1,6 мкг MS2 РНК на працягу 16 гадзін пры 37°C, не прыводзіць да выяўленай дэградацыі, як вызначана.
6.Кішачная палачкаДНК:120 ЕД Bst ДНК-палімеразы V2 правяраюць на наяўнасць геномнай ДНК кішачнай палачкі з дапамогай кПЦР TaqMan з праймерамі, спецыфічнымі для локуса 16S рРНК E. coli.Забруджванне геномнай ДНК E. coli складае ≤1 копіі.
Рэакцыя LAMP
| Кампаненты | 25мкл |
| Буфер 10×HC Bst V2 | 2,5 мкл |
| MgSO4 (100 мМ) | 1,5 мкл |
| dNTP (10 мМ кожны) | 3,5 мкл |
| SYTO™ 16 зялёны (25×)a | 1,0 мкл |
| Сумесь грунтоўкіb | 6 мкл |
| Bst ДНК-палімераза V2 (без гліцэрыны) (8 ЕД/мкл) | 1 мкл |
| Шаблон | × мкл |
| ddH₂O | Да 25 мкл |
Заўвагі:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): у адпаведнасці з эксперыментальнымі патрэбамі, іншыя фарбавальнікі могуць быць выкарыстаны ў якасці замены;
2) б.Сумесь грунтоўкі: атрымліваецца шляхам змешвання 20 мкМ FIP, 20 мкМ BIP, 2,5 мкМ F3, 2,5 мкМ B3, 5 мкМ LF, 5 мкМ LB і іншых аб'ёмаў.
Рэакцыя і стан
1 × буфер HC Bst V2, тэмпература інкубацыі ад 60°C да 65°C.
Цеплавая інактывацыі
80°C, 20 хвілін
