2×HiF Taq плюс майстар-мікс
Кат. №: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (з фарбавальнікам) - гэта гатовы да ўжывання 2 × папярэдні змешаны раствор, які змяшчае Plus HIF ДНК-палімеразу, dNTP і аптымізаваны буфер.Два моноклональных антыцелы пры пакаёвай тэмпературы, якія інгібіруюць актыўнасць палімеразы і актыўнасць 3'→5'экзануклеазы, дадаюцца ў асноўную сумесь для лёгкай і высокаспецыфічнай ПЦР з гарачым стартам.Фактар пашырэння дадаецца ў майстар-мікс, каб надаць ферменту здольнасць да ампліфікацыі доўгага фрагмента, даўжыня ампліфікацыі можа складаць да 13 кб, фермент мае актыўнасць ДНК-палімеразы 5′→3′ і 3′→5′ экзануклеазнай актыўнасцю, яго дакладнасць у 83 разы вышэй, чым Taq ДНК-палімеразы, што ў 9 разоў больш, чым звычайнай ДНК-палімеразы.Ён падыходзіць для ўзмацнення складаных шаблонаў, прадукт узмацнення - тупы канец.
2×HIF Taq plus Master Mix (з фарбавальнікам) мае такія перавагі, як хуткасць і лёгкасць, высокая адчувальнасць, моцная спецыфічнасць, добрая стабільнасць і г.д., рэакцыйная сістэма патрабуе толькі дадання праймераў і шаблонаў і можа быць узмоцнена з дапамогай двух- крокавы пратакол, што спрашчае этапы эксперыменту і эканоміць час.Гэты прадукт змяшчае фарбавальнікі-індыкатары электрафарэзу, і прадукты ПЦР можна выкарыстоўваць непасрэдна для электрафарэзу.Акрамя таго, прадукт таксама змяшчае спецыфічны ахоўны агент, так што майстар-мікс можа падтрымліваць стабільную актыўнасць пасля шматразовага замарожвання-адтавання.
Умовы захоўвання
Прадукты павінны захоўвацца пры -25 ~ -15 ℃ на працягу 1 года.
Тэхнічныя характарыстыкі
| Спецыфікацыя прадукту | Майстар Мікс |
| Канцэнтрацыя | 2× |
| Гарачы старт | Убудаваны гарачы старт |
| Навісь | Тупы |
| Хуткасць рэакцыі | Імклівы |
| Памер (канчатковы прадукт) | Да 13кб |
| Умовы для транспарціроўкі | Сухі лёд |
| Тып вырабы | Прэміксы ПЦР высокай дакладнасці |
Інструкцыя
1.Сістэма рэакцыі ПЦР
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) |
| Шаблон ДНК | Падыходзіць |
| Праймер (10 мкмоль/л) | 2.5 |
| Зваротны праймер (10 мкмоль/л) | 2.5 |
| 2×HIF Taq плюс майстар-мікс | 25 |
| ddH2O | да 50 |
2.Рэкамендаванае выкарыстанне розных шаблонаў
| Тып шаблону | Павялічыць фрагменты памерам ад 1 кб да 10 кб |
| Геномная ДНК | 50нг-200нг |
| Плазмидная або вірусная ДНК | 10пг-20нг |
| кДНК | 1-2,5 мкл (не перавышаць 10% канчатковага аб'ёму рэакцыі ПЦР) |
3.Пратакол узмацнення
1) Двухэтапны пратакол (шаблон складанасці)
| Цыкл крок | тэмп. | Час | Цыклы |
| Пачатковая дэнатурацыя | 98 ℃ | 3 хвіліны | 1 |
| Дэнатурацыя | 98 ℃ | 10 сек | 30-35 |
| Пашырэнне | 68 ℃ | 30 с/кб | |
| Канчатковае пашырэнне | 72 ℃ | 5 хвілін | 1 |
2) Трохэтапны пратакол (звычайны пратакол)
| Цыкл крок | тэмп. | Час | Цыклы |
| Пачатковая дэнатурацыя | 98 ℃ | 3 хвіліны | 1 |
| Дэнатурацыя | 98 ℃ | 10 сек | 30-35 |
| Адпал | 60 ℃ | 20 сек | |
| Пашырэнне | 72 ℃ | 30 с/кб | |
| Канчатковае пашырэнне | 72 ℃ | 5 хвілін | 1 |
3) Градыентны пратакол адпалу (шаблон складанасці)
| Цыкл крок | тэмпература | Час | Цыклы |
| Пачатковая дэнатурацыя | 98 ℃ | 3 хвіліны | 1 |
| Дэнатурацыя | 98 ℃ | 10 сек | 15 (зніжэнне на 1 ℃ за цыкл) |
| Градыентны адпал | 70-55 ℃ | 20 сек | |
| Пашырэнне | 72 ℃ | 30 с/кб | |
| Дэнатурацыя | 98 ℃ | 10 сек |
20 |
| Адпал | 55 ℃ | 20 сек | |
| Пашырэнне | 72 ℃ | 30 с/кб | |
| Канчатковае пашырэнне | 72 ℃ | 5 хвілін | 1 |
Функцыі пры розных пратаколах узмацнення
| Пратаколl | Двухкрокавы | Трохступеньчатая | Градыентны адпал |
| спец. | хуткі | сярэдні | павольна |
| Спецыфіка | высокая | сярэдні | высокая |
| Выхад ПЦР | сярэдні | высокая | сярэдні |
| Хуткасць выяўлення | высокая | сярэдні | высокая |
Заўвагі
Калі ласка, апранайце неабходныя сродкі індывідуальнай абароны, такія як лабараторны халат і пальчаткі, каб гарантаваць ваша здароўе і бяспеку!
