BspQI
BspQI можа быць рэкамбінантна экспрэсаваны ў кішачнай палачцы, якая можа распазнаваць пэўныя сайты і ўтвараецца пад
BspQI, рэстрыкцыйная эндануклеаза IIs, атрымана з рэкамбінантнага штаму E. coli, які нясе кланаваны і мадыфікаваны ген BspQI з Bacillus sphaericus.Ён можа распазнаваць пэўныя сайты, і паслядоўнасць распазнання і сайты расшчаплення наступныя:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Асаблівасці прадукту
1. Высокая актыўнасць, Хуткае страваванне;
2. Нізкая зоркавая актыўнасць, якая забяспечвае дакладную рэзку «скальпелем»;
3. Без BSA і жывёльнага паходжання;
Адчувальнасць да метылявання
Dam метилирование:Неадчувальны;
Dсм метилирование:Неадчувальны;
Метыляванне CpG:Неадчувальны;
Умовы захоўвання
Прадукт павінен быць адпраўлены ≤ 0℃;Захоўваць пры -25 ~ - 15 ℃ умовах.
Буфер для захоўвання
20 мм Трис-HCl, 0,1 мм ЭДТА, 500 мм KCl, 1,0 мм дитиотреитол, 500 мкг/мл рэкамбінантны альбумін, 0,1% Trition X-100 і 50% гліцэрына (рН 7,0 пры 25°C).
Вызначэнне адзінкі
Адна адзінка вызначаецца як колькасць фермента, неабходнага для пераварвання 1 мкг ДНК ўнутранага кантролю за 1 гадзіну пры 50°C у агульным рэакцыйным аб'ёме 50 мкл.
Кантроль якасці
Аналіз чысціні бялку (SDS-PAGE):Чысціня BspQI была ≥95%, вызначаная аналізам SDS-PAGE.
РНКаза:10U BspQI з 1,6 мкг MS2 РНК на працягу 4 гадзін пры 50 ℃ не прыводзіць да дэградацыі, як вызначана электрафарэзам у агарозным гелі.
Неспецыфічная ДНКазная актыўнасць:10U BspQI з 1 мкг λ ДНК пры 50 ℃ на працягу 16 гадзін у параўнанні з 50 ℃ на працягу 1 гадзіны не дае лішку ДНК, як вызначана электрафарэзам у агарозным гелі.
Перавязка і перарэзка:Пасля расшчаплення 1 мкг λДНК 10U BspQI фрагменты ДНК можна звязаць ДНК-лігазай Т4 пры 16ºC.І гэтыя перавязаныя фрагменты можна паўторна выразаць з дапамогай BspQI.
Кішачная палачка ДНК: Кішачная палачка 16s рДНК-спецыфічнае выяўленне TaqMan qPCR паказала, што астатак геному E.coli ≤ 0,1 пг/мкл.
Рэшткі бялку гаспадара:≤ 50 праміле
Бактэрыяльны Эндатаксін: LAL-тэст, у адпаведнасці з Кітайскай фармакапеяй IV 2020 г., метад тэставання ліміту геля, агульнае правіла (1143).Змест бактэрыяльнага эндатаксіну павінна быць ≤10 EU/мг.
Сістэма і ўмовы рэакцыі
| Кампанент | Аб'ём |
| BspQ I (10 ЕД/мкл) | 1 мкл |
| ДНК | 1 мкг |
| 10 х BspQ I буфер | 5 мкл |
| дд H2O | Да 50 мкл |
Умовы рэакцыі: 50 ℃, 1~ 16 гадзін.
Цеплавая інактывацыя: 80°C на працягу 20 хвілін.
Рэкамендаваныя рэакцыйная сістэма і ўмовы могуць забяспечыць адносна добры ферментны эфект стрававання, што толькі для даведкі, калі ласка, звярніцеся да эксперыментальных вынікаў для атрымання падрабязнай інфармацыі.
Прымяненне вырабы
Расшчапленне рэстрыкцыйнай эндануклеазай, хуткае кланаванне.
Заўвагі
1. Аб'ём фермента ≤ 1/10 рэакцыйнага аб'ёму.
2. Актыўнасць зоркі можа адбыцца, калі канцэнтрацыя гліцэрыны больш за 5%.
3. Актыўнасць расшчаплення можа адбыцца, калі суадносіны субстрата ніжэй рэкамендаванага.
