Рназе А
Рыбануклеаза А (РНКаза) - адналанцуговы поліпептыд, які змяшчае 4 дысульфідныя сувязі з малекулярнай масай каля 13,7 кДа.РНКаза A - гэта эндарыбануклеаза, якая спецыяльна расшчапляе адналанцуговую РНК па астатках C і U.У прыватнасці, пры расшчапленні распазнаецца фасфадыэфірная сувязь, утвораная 5'-рыбозай нуклеатыду і фасфатнай групай на 3'-рыбозе суседняга пірымідынавага нуклеатыду, так што 2,3'-цыклічныя фасфаты гідралізуюцца да адпаведных 3 'нуклеазід-фасфаты (напрыклад, pG-pG-pC-pA-pG расшчапляецца РНКазай А для атрымання pG-pG-pCp і A-PG).РНКаза А найбольш актыўна расшчапляе одноцепочечную РНК.Рэкамендуемая рабочая канцэнтрацыя складае 1-100 мкг/мл, сумяшчальная з рознымі рэакцыйнымі сістэмамі.Нізкая канцэнтрацыя солі (0-100 мМ NaCl) можа быць выкарыстана для разразання адналанцуговай РНК, двухцепочечной РНК і ланцугоў РНК, утвораных у выніку гібрыдызацыі РНК-ДНК.
Аднак пры высокай канцэнтрацыі солі (≥0,3 М) РНКаза А спецыфічна расшчапляе толькі адналанцуговую РНК.
РНКаза А найбольш часта выкарыстоўваецца для выдалення РНК падчас падрыхтоўкі плазмидной ДНК або геномнай ДНК.Незалежна ад таго, актыўная ДНКаза ў працэсе падрыхтоўкі, можа лёгка паўплываць на рэакцыю.Традыцыйны метад кіпячэння на вадзяной лазні можна выкарыстоўваць для інактывацыі ДНКазной актыўнасці.Гэты прадукт не ўтрымлівае ДНКазы і протеазы і не патрабуе тэрмічнай апрацоўкі перад ужываннем.Акрамя таго, гэты прадукт можа быць выкарыстаны ў малекулярна-біялагічных эксперыментах, такіх як аналіз абароны РНКазы і аналіз паслядоўнасці РНК.
Умовы захоўвання
Прадукт варта захоўваць пры -25 ℃ ~ - 15 ℃ на працягу 2 гадоў.
Тэхнічныя характарыстыкі
| Знешні выгляд | Парашок |
| Колькасць | 100 мг / 1 г |
| Тып вырабы | РНКаза А |
Інструкцыя
Гэта адзін з распаўсюджаных метадаў падрыхтоўкі раствора для захоўвання РНКазы A.Яго таксама можна прыгатавацьіншымі метадамі ў адпаведнасці з традыцыйнымі метадамі ў лабараторыі або даведачнай літаратуры (напрыклад,прамое растварэнне ў 10 мм Tris-HCl, pH 7,5 або раствор Tris-NaCl)
1. Выкарыстоўвайце 10 мМ ацэтату натрыю (pH 5,2), каб прыгатаваць 10 мг/мл раствора для захоўвання РНКазы А.
2. Награванне пры 100 ℃ на працягу 15 хвілін.
3. Астудзіце да пакаёвай тэмпературы, дадайце 1/10 аб'ёму 1 М Tris-HCl (pH 7,4), давядзіце pH да 7,4 (длянапрыклад, дадайце 500 мл 10 мг/мл раствора для захоўвання РНКазы 1 М Tris-HCl, pH7,4).
4. Запакаваная пры тэмпературы -20 ℃ для захоўвання ў замарожаным выглядзе, якая можа быць стабільнай да 2 гадоў.
[Заўвагі]:
Пры кіпячэнні раствора РНКазы ў нейтральных умовах утворыцца асадак РНКазы;Варыце яго пры больш нізкім рн, і калі ёсць асадак, гэта можа назірацца, што можа быць выклікана наяўнасцю бялковых прымешак.Калі пасля кіпячэння знойдзены асадак, прымешкі можна выдаліць з дапамогай высакахуткаснага цэнтрыфугавання (13000 абаротаў у хвіліну), а затым упакаваць для захоўвання ў замарозцы.
Заўвагі
Калі ласка, апранайце неабходныя СІЗ, такія як лабараторны халат і пальчаткі, каб гарантаваць ваша здароўе і бяспеку.
