УДГ/УНГ ферменты
UDG (урацыл-ДНК-гліказілаза) можа каталізаваць гідроліз N-гліказіднай сувязі паміж асновай урацылу і цукрова-фасфатнай асновай у цДНК і дцДНК.Ён можа лёгка кантраляваць аэразольнае забруджванне і падыходзіць для звычайных сістэм малекулярнай біялогіі, такіх як ПЦР, кПЦР, RT-кПЦР і LAMP.
Тэхнічныя характарыстыкі
| Хост выразаў | Рэкамбінантныя E. coli з генам урацылавай ДНК-гліказілазы |
| Малекулярная маса | 24. 8кДа |
| Чысціня | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Цеплавая інактывацыі | 95 ℃, 5~10 мін |
| Вызначэнне адзінкі | Адна адзінка (U) вызначаецца як колькасць фермента, неабходнага для каталізацыі гідролізу 1 мкг дцДНК, якая змяшчае dU, за 30 хвілін пры 25 ℃. |
Захоўванне
Прадукт варта захоўваць пры -25℃~-15°C на працягу двух гадоў.
Інструкцыя
1.Падрыхтоўка рэакцыйнай сумесі ПЦР па наступнай сістэме
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) | Канчатковая канцэнтрацыя |
| 10×ПЦР буфер (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль/LMgCl | 3 | 1,5 ммоль/л |
| dUTP (10 ммоль/л) | 3 | 0,6 ммоль/л |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 ммоль/вымыванне) | 1 | 0,2 ммоль/вымыванне |
| Шаблон ДНК | X | - |
| Primer1 (10 мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Праймер 2 (10 мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Taq ДНК-палімераза (5 ЕД/мкл) | 0. 5 | 0,05 ЕД/мкл |
| Урацил ДНК-гликозилаза (УДГ/УНГ), 1 ЕД/мкл | 1 | 1 ЕД/мкл |
| ddH₂O | Да 50 | - |
нататка: У адпаведнасці з эксперыментальнымі патрабаваннямі канчатковая канцэнтрацыя dUTP можа быць адрэгулявана ў межах 0,2-0,6 ммоль/л, а 0,2 ммоль/л dTTP можна дадаваць выбарачна.
2.Працэдура ампліфікацыі
| Цыкл крок | тэмпература | Час | Цыклы |
| Дэградацыя шаблону, які змяшчае dU | 25 ℃ | 10 хвілін | 1 |
| Актывацыя УДГ, пачатковая дэнатурацыя шаблону | 95 ℃ | 5~10 хвілін | 1 |
| Дэнатурацыя | 95 ℃ | 10 сек |
30-35 |
| Адпал | 60 ℃ | 20 сек | |
| Пашырэнне | 72 ℃ | 30 сек/кб | |
| Канчатковае пашырэнне | 72 ℃ | 5 хвілін | 1 |
нататка: Час рэакцыі пры 25°C можна рэгуляваць на працягу 5-10 хвілін у адпаведнасці з эксперыментальнымі патрабаваннямі.
Заўвагі
1.УДГ актыўны ў большасці буфераў рэакцыі ПЦР.
2.Ферменты павінны захоўвацца ў скрыні з лёдам або на ледзяной ванне пры выкарыстанні і павінны захоўвацца пры тэмпературы -20 °C адразу пасля выкарыстання.
3.Калі ласка, апранайце неабходныя СІЗ, такія як лабараторны халат і пальчаткі, каб гарантаваць ваша здароўе і бяспеку!
