Інгібітар Рназы (без гліцэрыны)
Інгібітар мышынай РНКазы - гэта рэкамбінантны інгібітар мышынай РНКазы, экспрэсіраваны і вычышчаны з E.coli.Ён звязваецца з РНКазой A, B або C у суадносінах 1:1 праз некавалентную сувязь, тым самым інгібіруючы актыўнасць трох ферментаў і абараняючы РНК ад дэградацыі.Аднак ён не эфектыўны супраць РНКазы 1, РНКазы Т1, нуклеазы S1, РНКазы Н або РНКазы Aspergillus.Інгібітар мышынай РНКазы быў пратэставаны з дапамогай RT-PCR, RT-qPCR і IVT мРНК і быў сумяшчальны з рознымі камерцыйнымі зваротнымі транскрыптазамі, ДНК-палімеразамі і РНК-палімеразамі.
У параўнанні з інгібітарамі РНКазы чалавека мышыны інгібітар РНКазы не ўтрымлівае двух цыстэінаў, якія вельмі адчувальныя да акіслення, якое выклікае інактывацыю інгібітара.Гэта робіць яго стабільным пры нізкіх канцэнтрацыях DTT (менш за 1 ммоль).Гэта асаблівасць робіць яго прыдатным для выкарыстання ў рэакцыях, дзе высокія канцэнтрацыі DTT неспрыяльныя для рэакцыі (напрыклад, RT-PCR у рэальным часе).
Aпрымяненне
Гэты прадукт можа быць шырока выкарыстаны ў любых эксперыментах, дзе магчыма ўмяшанне РНКазы, каб пазбегнуць дэградацыі РНК, напрыклад:
1. Сінтэз кДНК першага ланцуга, RT-PCR, RT-qPCR і г.д.;
2. Абараніць РНК ад дэградацыі пры транскрыпцыі/трансляцыі in vitro (напрыклад, рэплікацыя віруса in vitro);
3. Інгібіраванне актыўнасці РНКазы пры выдзяленні і ачыстцы РНК.
Умовы захоўвання
Захоўваць пры -25～-15℃;
Цыклы замарожвання-адтавання ≤ 5 разоў;
Тэрмін дзеяння 1 год.
Вызначэнне адзінкі
Адна адзінка вызначаецца як колькасць інгібітара РНКазы, неабходнае для інгібіравання актыўнасці 5 нг РНКазы А на 50%.
Малекулярная маса
Інгібітар РНКазы (без гліцэрыны) - гэта бялок з масай 50 кДа.
Кантроль якасці
Экзануклеаза дзейнасць:
Інкубацыя 40 ЕД фермента з 1 мкг пераваранай ДНК λ-Hind III на працягу 16 гадзін пры 37°C не прывяла да выяўленай дэградацыі ДНК, вызначанай электрафарэзам у гелі.
Эндануклеазная актыўнасць:
Інкубацыя 40 ЕД фермента з 1 мкг λ ДНК на працягу 16 гадзін пры 37°C не прывяла да выяўленай дэградацыі ДНК, вызначанай электрафарэзам у гелі.
Насяканне дзейнасць:
Інкубацыя 40 ЕД фермента з 1 мкг pBR322 на працягу 16 гадзін пры 37 ℃ не прывяла да выяўленай дэградацыі ДНК, як было вызначана электрафарэзам у гелі.
РНКаза актыўнасць:
Інкубацыя 40 ЕД фермента з 1,6 мкг MS2 РНК на працягу 4 гадзін пры 37 ℃ не прывяла да выяўленай дэградацыі РНК, вызначанай электрафарэзам у гелі.
E.ДНК coli:
40 ЕД фермента выяўляецца з дапамогай кПЦР TaqMan.ДНК E.coli складае ≤ 0,1 пг/40 ЕД.
Nнататкаs
1. Не падтрасайце і не памешвайце моцна, каб прадухіліць інактывацыю фермента.
2. Інгібітар РНКазы актыўны пры тэмпературах ад 25 ℃ да 55 ℃ і інактывуецца пры ≥65 ℃.
3. Актыўнасць РНКазы Н, РНКазы 1 і РНКазы Т1 не інгібіруецца.
4. Дыяпазон рн для інгібіравання актыўнасці РНКазы шырокі (актыўны пры рн 5-9), выяўляючы максімальную актыўнасць пры рн 7-8.
