Набор для экстракцыі віруснай ДНК/РНК
Гэты набор падыходзіць для хуткай экстракцыі віруснай ДНК/РНК высокай чысціні з такіх узораў, як мазкі з насаглоткі, мазкі з навакольнага асяроддзя, супернатанты клетачнай культуры і супернатанты тканкавых гамагенатаў.Набор заснаваны на тэхналогіі мембраннай ачысткі з дыяксіду крэмнія, якая пазбаўляе ад неабходнасці выкарыстоўваць арганічныя растваральнікі фенол/хлараформ або працаёмкае асаджэнне спіртам для экстракцыі віруснай ДНК/РНК высокай якасці.Атрыманыя нуклеінавыя кіслоты не ўтрымліваюць прымешак і гатовыя да выкарыстання ў наступных эксперыментах, такіх як зваротная транскрыпцыя, ПЦР, ОТ-ПЦР, ПЦР у рэальным часе, секвенирование наступнага пакалення (NGS) і Нозерн-блот.
Умовы захоўвання
Захоўваць пры 15 ~ 25 ℃ і транспартаваць пры пакаёвай тэмпературы
Кампаненты
| Кампаненты | 100RXNS |
| Буферная В.Л | 50 мл |
| Буфер RW | 120 мл |
| ddH2 O без РНКаз | 6 мл |
| Калонкі FastPure РНК | 100 |
| Прабіркі для збору (2 мл) | 100 |
| Прабіркі для збору без РНКаз (1,5 мл) | 100 |
Буфер VL:Забяспечце асяроддзе для лізісу і звязвання.
Буфер RW:Выдаліце рэшткі бялку і іншыя прымешкі.
ddH2O без РНКазы:Элюіруйце ДНК/РНК з мембраны ў спінавай калонцы.
Калонкі FastPure RNA:Спецыяльна адсарбуе ДНК/РНК.
Прабіркі для збору 2 мл:Збярыце фільтрат.
Прабіркі для збору без РНКаз 1,5 мл:Збярыце ДНК/РНК.
Прыкладанні
Мазкі з насаглоткі, мазкі з навакольнага асяроддзя, супернатанты культур клетак і супернатанты тканкавых гамагенатаў.
Самастойна падрыхтаваны матэрials
Наканечнікі піпетак без РНКаз, цэнтрыфужныя прабіркі без РНКаз на 1,5 мл, цэнтрыфуга, віхравы міксер і піпеткі.
Працэс эксперыменту
Выканайце ўсе наступныя крокі ў шафе біялагічнай бяспекі.
1. Дадайце 200 мкл узору ў цэнтрыфужную прабірку без РНКаз (дапоўніце PBS або 0,9% NaCl у выпадку недастатковага ўзору), дадайце 500 мкл буфера VL, добра змяшайце, варочаючы на працягу 15-30 секунд, і цэнтрыфугуйце на кароткі час сабраць сумесь на дне прабіркі.
2. Змесціце калонкі FastPure РНК у прабіркі для збору 2 мл.Перанясіце сумесь з этапу 1 у калонкі FastPure RNA, цэнтрыфугуйце пры 12 000 абаротаў у хвіліну (13 400 × g) на працягу 1 хвіліны і выкіньце фільтрат.
3. Дадайце 600 мкл буфера RW у калонкі FastPure RNA, цэнтрыфугуйце пры 12 000 абаротаў у хвіліну (13 400 × g) на працягу 30 секунд і выкіньце фільтрат.
4. Паўтарыце крок 3.
5. Цэнтрыфугуйце пустую калонку пры 12 000 абаротаў у хвіліну (13 400 × g) на працягу 2 хвілін.
6. Асцярожна перанясіце калонкі FastPure RNA у новыя прабіркі для збору без РНКаз аб'ёмам 1,5 мл (прадастаўляюцца ў камплекце) і дадайце 30–50 мкл ddH2O без РНКаз у цэнтр мембраны, не дакранаючыся калонкі.Дайце пастаяць пры пакаёвай тэмпературы на працягу 1 хвіліны і цэнтрыфугуйце пры 12000 абаротаў у хвіліну (13400 × g) на працягу 1 хвіліны.
7. Выкіньце слупкі FastPure RNA.ДНК/РНК можна выкарыстоўваць непасрэдна для наступных аналізаў або захоўваць пры -30~-15°C на працягу кароткага перыяду або -85~-65°C на працягу больш доўгага перыяду.
Заўвагі
Толькі для даследчага выкарыстання.Не для выкарыстання ў дыягнастычных працэдурах.
1. Загадзя давядзіце ўзоры да пакаёвай тэмпературы.
2. Вірусы вельмі заразныя.Калі ласка, пераканайцеся, што ўсе неабходныя меры бяспекі прыняты перад эксперыментам.
3. Пазбягайце паўторнага замарожвання і адтавання ўзору, бо гэта можа прывесці да дэградацыі або зніжэння выхаду экстрагаванай віруснай ДНК/РНК.
4. Самастойна падрыхтаванае абсталяванне ўключае наканечнікі для піпетак без РНКаз, цэнтрыфужныя прабіркі без РНКаз на 1,5 мл, цэнтрыфугу, віхравы змяшальнік і піпеткі.
5. Пры выкарыстанні набору апранайце лабараторны халат, аднаразовыя латексныя пальчаткі і аднаразовую маску і выкарыстоўвайце расходныя матэрыялы без РНКаз, каб мінімізаваць рызыку заражэння РНКазамі.
6. Выконвайце ўсе дзеянні пры пакаёвай тэмпературы, калі не пазначана іншае.
Механізм і працоўны працэс
