One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Кат. №: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix прызначаны для колькаснага вызначэння флуарэсцэнцыі на аснове фарбавальніка SYBR Green I.З дапамогай генаспецыфічных праймераў рэакцыі зваротнай транскрыпцыі і кПЦР выконваюцца ў адной прабірцы, пазбаўляючы ад неабходнасці паўторнага адкрыцця вечка і піпетавання, што значна павышае эфектыўнасць аналізу і зніжае рызыку заражэння.Для ўзораў РНК набор выкарыстоўвае тэрмаўстойлівую зваротную транскрыптазу для эфектыўнага сінтэзу кДНК і ДНК-палімеразу HotStart Taq для колькаснай ампліфікацыі.Пры аптымізаванай буфернай сістэме адчувальнасць набору можа дасягаць 0,1 пг для моцна выяўленых мішэняў і да 1 пг для ўмерана выяўленых мішэняў.Набор падыходзіць для ампліфікацыі і колькаснага вызначэння ўзораў ДНК.Гэта дазваляе адчувальна выяўляць і колькасна вызначаць нуклеінавыя кіслоты з розных узораў раслін і жывёл, клетак і мікраарганізмаў.
Кампаненты
| No | Імя | Аб'ём | Аб'ём |
| 1 | Пашыраны буфер | 250 мкл | 2×1,25 мл |
| 2 | Advanced Enzyme Mix | 20 мкл | 200 мкл |
| 3 | Без РНКазы H2O | 250 мкл | 2×1,25 мл |
Умовы захоўвання
Гэты прадукт трэба захоўваць пры -25 ~ -15 ℃ удалечыні ад святла на працягу 1 года.
Інструкцыя
1. Канфігурацыя сістэмы Reactiond
| Кампаненты | Аб'ём (мкл) | Аб'ём (мкл) | Канчатковая канцэнтрацыя |
| Пашыраны буфер | 12.5 | 25 | 1× |
| Advanced Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Зваротны праймер (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Шаблон РНКb | X | X | - |
| Без РНКазы H2Оc | да 25 | да 50 | - |
Заўвагі:
1) а.ТКанчатковая канцэнтрацыя праймера была 0,2 мкмоль/л, якую таксама можна рэгуляваць у межах ад 0,1 да 1 мкмоль/л, калі гэта неабходна.
2) б.Рэагент надзвычай адчувальны, з агульнай РНК у дыяпазоне 1 пг-1 мкг, а тэставанне чалавечых узораў паказала аптымальнае ўвядзенне 1 пг-100 нг з кантролем агульнага значэння Ct у дыяпазоне 15-30 у залежнасці ад неабходнасці.
3) в.Рэкамендуецца выкарыстоўваць 20 мкл або 50 мкл для забеспячэння сапраўднасці і ўзнаўляльнасці ампліфікацыі мэтавага гена.
4) d.Калі ласка, рыхтуйцеся на звышчыстай лаўцы і выкарыстоўвайце наканечнікі без рэшткаў нуклеазы і рэакцыйныя прабіркі;рэкамендуюцца наканечнікі з фільтравальнымі картрыджамі.Пазбягайце перакрыжаванага і аэразольнага забруджвання.
2.Праграма рэакцыі
| Цыкл крок | тэмп. | Час | Цыклы |
| Зваротная транскрыпцыя | 50 ℃a | 6 хвілін | 1 |
| Пачатковая дэнатурацыя | 95 ℃ | 5 хвілін | 1 |
| Рэакцыя ампліфікацыі | 95 ℃ | 15 сек | 40 |
| 60 ℃b | 30 сек | ||
| Стадыя крывой плаўлення | Налады інструмента па змаўчанні | 1 | |
Заўвагі:
1) а.Тэмпература зваротнай транскрыпцыі можа быць выбрана ў межах 50-55°C у адпаведнасці з эксперыментальнымі патрэбамі.Для ўзораў ДНК працэс зваротнай транскрыпцыі можна апусціць.
2) б.У асаблівых выпадках тэмпературу адпалу/падаўжэння можна рэгуляваць у адпаведнасці са значэннем Tm праймера, рэкамендуецца 60°C.
Заўвагі
1. Гэты прадукт прызначаны толькі для навуковага выкарыстання.
2. Для вашай бяспекі працуйце ў лабараторных халатах і аднаразовых пальчатках.
