ДНК-палімераза Wild Taq
ДНК-палімераза Taq - гэта тэрмастабільная ДНК-палімераза з Thermus aquaticus YT-1, якая валодае палімеразнай актыўнасцю 5′→3′ і эндануклеазнай актыўнасцю 5′-лоскута.
Кампаненты
| Кампанент | HC1010А-01 | HC1010А-02 | HC1010А-03 | HC1010А-04 |
| 10 × буфер Taq | 2×1 мл | 2×10 мл | 2×50 мл | 5×200 мл |
| Taq ДНК-палімераза (5 ЕД/мкл) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5×10 мл |
Умовы захоўвання
Транспарціроўка пры тэмпературы ніжэй за 0°C і захоўванне пры тэмпературы ад -25°C~-15°C.
Вызначэнне адзінкі
Адна адзінка вызначаецца як колькасць фермента, які ўключае 15 нмоль dNTP у нерастваральны ў кіслаце матэрыял за 30 хвілін пры 75°C.
Кантроль якасці
1.Аналіз чысціні бялку (SDS-PAGE):Чысціня ДНК-палімеразы Taq была ≥95%, вызначаная аналізам SDS-PAGE.
2.EndАктыўнасць onuclease:Мінімум 5 ЕД Taq ДНК-палімеразы з 1 мкг λДНК на працягу 16 гадзін пры 37 ℃ не прыводзіць да выяўленай дэградацыі, як вызначана.
3.Актыўнасць экзонуклеазы:Мінімум 5 ЕД Taq ДНК-палімеразы з 1 мкг λ -Hind Ⅲ расшчапляюць ДНК на працягу 16 гадзін пры 37 ℃ не прыводзіць да выяўленай дэградацыі, як вызначана.
4.Актыўнасць Nickase:Мінімум 5 ЕД ДНК-палімеразы Taq з 1 мкг ДНК pBR322 на працягу 16 гадзін пры 37°C не прыводзіць да выяўленай дэградацыі, як вызначана.
5.Актыўнасць РНКазы:Мінімум 5 ЕД Taq ДНК-палімеразы з 1,6 мкг MS2 РНК на працягу 16 гадзін пры 37°C не прыводзіць да выяўленай дэградацыі, як вызначана.
6.Кішачная палачкаДНК:5 ЕД ДНК-палімеразы Taq правяраюць на наяўнасць геномнай ДНК кішачнай палачкі з дапамогай кПЦР TaqMan з праймерамі, спецыфічнымі для локуса 16S рРНК E. coli.Забруджванне геномнай ДНК E. coli складае ≤1 копіі.
7.ПЦР-ампліфікацыя (5,0 кб лямбда-ДНК)- Рэакцыя аб'ёмам 50 мкл, якая змяшчае 5 нг лямбда-ДНК з 5 адзінкамі ДНК-палімеразы Taq для 25 цыклаў ПЦР-ампліфікацыі, прыводзіць да чаканага прадукту памерам 5,0 кб.
Налада рэакцыі
| Кампаненты | Аб'ём |
| Шаблон ДНКa | неабавязковы |
| 10 мкМ Forward Primer | 1 мкл |
| 10 мкМ Зваротны праймер | 1 мкл |
| Сумесь dNTP (10 мМ кожны) | 1 мкл |
| Буфер 10×Taq | 5 мкл |
| Taq ДНК-палімеразаб | 0,25 мкл |
| Безнуклеазная вада | Да 50 мкл |
Заўвагі:
1) Аптымальная канцэнтрацыя рэакцыі розных шаблонаў розная.У наступнай табліцы паказана рэкамендаванае выкарыстанне шаблону 50 мкл рэакцыйнай сістэмы.
| ДНК | Сума |
| Геномная | 1 нг-1 мкг |
| Плазміда або вірус | 1 пг-1 нг |
2) Аптымальная канцэнтрацыя ДНК-палімеразы Taq можа вагацца ад 0,25 мкл~1 мкл у спецыялізаваных прылажэннях.
Рэакцыяпраграма
| Крок | тэмпература(°C) | Час | Цыклы |
| Пачатковая дэнатурацыяa | 95 ℃ | 5 хвілін | - |
| Дэнатурацыя | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 цыклаў |
| Адпалб | 60 ℃ | 15 с | |
| Пашырэнне | 72 ℃ | 1кб/хв | |
| Канчатковае пашырэнне | 72 ℃ | 5 хвілін | - |
Заўвагі:
1) Пачатковая ўмова дэнатурацыі падыходзіць для большасці рэакцый ампліфікацыі і можа быць зменена ў залежнасці ад складанасці структуры шаблону.Калі структура шаблону складаная, час папярэдняй дэнатурацыі можна павялічыць да 5-10 хвілін, каб палепшыць першапачатковы эфект дэнатурацыі.
2) Тэмпературу адпалу неабходна адрэгуляваць у адпаведнасці са значэннем Tm праймера, якое звычайна ўсталёўваецца на 3~5 ℃ ніжэй, чым значэнне Tm праймера;Для складаных шаблонаў неабходна адрэгуляваць тэмпературу адпалу і павялічыць час падаўжэння для дасягнення эфектыўнага ўзмацнення.
